Plantes-carnivores01

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thomas228
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MessageSujet: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeVen 28 Déc 2012 - 21:27

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Dernière édition par dede718 le Lun 7 Jan 2013 - 21:37, édité 44 fois
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeVen 28 Déc 2012 - 22:08

Question con; on peut stériliser avec un autoclave? (classe b)
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeVen 28 Déc 2012 - 22:50

Citation :
Pour les questions et remarques merci de les poster ici https://www.plantes-carnivores01.com/t12732-test-culture-in-vitro

Je te répond sur ce topic Wink

Fred
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 1:44

Bon j'ai a peut près finis ce post selon moi ... même si je n'ai pas encore parlé du repiquage et de l'acclimatation Rolling Eyes mais bon ça vous donne déjà une idée de la CIV Wink
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thomas228

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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 10:50

Super !
Mais je n' cconnais rien en civ donc j'ai rien compris Laughing

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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:20

Genial! Sa seras trés utile à beaucoup de monde!(et à moi peu etre un jour Laughing )

dede718 a écrit:
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He! le masque c'est devant la bouche pas sur la tête ...[Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien]
Désole je n'ai pût résister [Vous devez être inscrit et connecté pour voir ce lien]

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thomas228

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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:27

Ted : "..."

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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:27

supre boulot!
comment tu t'assures de la stérilité de ta glovebox?
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:34

Ton protocole est super bien fait (on dirait ceux que j'ai en cours) ! Vraiment bravo Very Happy
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:48

Je préfère me péter une rotule à la batte de baseball plutôt que de me lancer dans ce chantier hallucinant Razz mais c'est super bien fait et intéressant Wink
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 11:52

Même question que Vernon. Je reste quand même septique quand à la réussite sans au moins un bec bunsen. Après si tu manipule extrêmement bien ça peut marcher.
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 12:11

Merci Very Happy

Citation :
He! le masque c'est devant la bouche pas sur la tête ...

Ouai j'ai essayé le masque devant la bouche et le nez mais bon résultat .... on voit rien ! Razz
Citation :

comment tu t'assures de la stérilité de ta glovebox?

Alors déjà ce qui serait mieux c'est de changé le couvercle de la boite de rangement avec une plaque en verre pour la rendre vraiment hermétique et après c'est essuie tout dans le fond et pulvérisation de javel et/ou éthanol un peu partout et laissé reposé une dizaine de minute Wink

Citation :
Je préfère me péter une rotule à la batte de baseball plutôt que de me lancer dans ce chantier hallucinant

Laughing Ouai c'est sur que dans un labo ou ya déjà tout c'est quand même beaucoup plus pratique !

Citation :
Je reste quand même septique quand à la réussite sans au moins un bec bunsen. Après si tu manipule extrêmement bien ça peut marcher.

Oui sur le principe ça marche ça à déjà été utilisé mais là j'ai eu quelques problème avec ma gélose j'ai du la refondre et la stérilisé 2 fois et la deuxième fois l stérilisation a été de 45 min au lieu de 30 ..., je pensais observer une période de 10 jours comme tu me l'avais conseillé pour tous mes "bocaux" mais vu que j'ai les partiels qui arrivent j'ai préféré tout faire directement, j'ai fais des boutures de feuilles de népenthès et je n'en ai pas vu par la suite sur le web, Bref si ça marche ce serait vraiment avec un peu de réussite mais bon c'est déjà pour me faire la main avec toutes ces manip Wink
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 12:22

En tout cas bravo tu as réussis à faire quelque chose de vraiment sérieux. Par contre quand tu mets tes milieux dans ta glovebox tu es obligé de nettoyer l'intérieur avec ton matos à l'intérieur ? Neutral

Citation :
pulvérisation de javel et/ou éthanol

Il vaut mieux ne faire qu'à la javel que avec de l'éthanol. L'éthanol apporte une dernière sécurité après la javel mais pas obligatoire. En microbiologie notre protocole de nettoyage se déroule de la façon suivante : Détergent, Javel, Eau.

Quand à pourquoi l'éthanol est moins efficace que la javel je suppose que c’est parce qu'il est plus volatile et que certains micro-organismes le tolère.
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 12:49

J'ai aussi lu que l'action fongique de l'éthanol était vraiment très faible ( là j'ai pulvérisé avec de la javel 20% uniquement mais certain utilise également l'alcool )

Citation :
Par contre quand tu mets tes milieux dans ta glovebox tu es obligé de nettoyer l'intérieur avec ton matos à l'intérieur ?

Oui j'ai d’ailleurs mon scalpel qui a pas mal réagit avec la javel ... Rolling Eyes

Fred
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 12:52

l'éthanol c'est bidon comme desinfectant, ça dégraisse les surfaces mais ne tue pas les bactéries ni les champi.
la javel c'est très bien, mais assez corrosif, tes outils vont rouiller.
par contre si tu peux te trouver un produit bactéricide et fongicide du style "Bacterianos", ce serait top. c'est un produit à diluer dans l'eau pour nettoyer les surfaces de travail à appliquer au papier essui-tout et le matériel par trempage. tu peux trouver ça dans les boutiques médicales qui vendent ou louent des lits, fauteuils roulants, prothèses, couches pour ainés...
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 13:40

Citation :
par contre si tu peux te trouver un produit bactéricide et fongicide du style "Bacterianos", ce serait top. c'est un produit à diluer dans l'eau pour nettoyer les surfaces de travail à appliquer au papier essui-tout et le matériel par trempage. tu peux trouver ça dans les boutiques médicales qui vendent ou louent des lits, fauteuils roulants, prothèses, couches pour ainés...

Merci pour l'astuce Wink, je connais justement quelqu'un qui bosse dans ce domaine...
Voir si ça a déjà été utilisé pour la désinfection dans la CIV aussi
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 13:44

Waw waw waw ça c'est du protocol expérimental! affraid

Bon eh bien je sais ce qui m'attends maintenant silent

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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 13:58

j'ai relu et deux choses à dire:
-concernant la gélose, trop d'agar ne risque-t-il pas de rendre l'eau disponible (Aw) ...moins dispo et donc de fatiguer les plantules?

-et c'est quoi ce HgCl2?
avec du mercure affraid
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 14:31

Citation :
j'ai relu et deux choses à dire:
-concernant la gélose, trop d'agar ne risque-t-il pas de rendre l'eau disponible (Aw) ...moins dispo et donc de fatiguer les plantules?

C'est possible mais les milieu de CIV sont en général assez compact et on peux renverser un milieu sans que celui si ne bouge, moi j'ai que celui placer au réfrigérateur qui me fais ça (et encore pas sur le long terme je pense) donc faudrait retester avec une concentration a 5,6g/L et placé au réfrigérateur

Citation :
-et c'est quoi ce HgCl2?
avec du mercure affraid

Oui c'est une technique apparemment utilisé avec du chlorure de mercure a 0,2g/L
Certain composé comme les désinfectants sont assez nocif et présentent des recommandations notamment les solutions basiques, faut quand même se renseigner sur ce qu'on utilise

Fred
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 14:42

Citation :
_ Domestos (nettoyant wc ) dilué à 10% (résultat positif trempage 10min pour les tissus) ou 70% (résultat négatif, contamination)....

Peux tu m'expliquer cette étape, je ne comprends pas le cas de résultats positifs ou négatifs.
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 14:47

Alors j'ai trouvé 2 expérience faite avec du Domestos de 2 personnes différentes
une dilué à 10% qui n'a pas subit de contamination et l'autre a 70% qui en a subit
Donc vu que je n'ai pas tester j'ai mis les 2 résultats Wink

Fred
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 14:49

Ok merci Wink
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 21:40

je voulais savoir: les géloses sont incubées à quelle température?
existe-t-il une température optimale?
et pour la lumière, tu préconises quoi?
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 21:52

Citation :
C'est possible mais les milieu de CIV sont en général assez compact et on peux renverser un milieu sans que celui si ne bouge, moi j'ai que celui placer au réfrigérateur qui me fais ça
A quelle température est ton réfrigérateur et pourquoi mettre la gélose dans le frigo?


Citation :
A tout cela ajouté la moitié du Volume de milieu final souhaité en eau déminéralisée stérile donc ici 200ml;
y ajouter les inhibiteurs comme la PPM "Plant Preservative Mixture" ( environ 1mL/L de Volume de milieu final souhaité )et autres hormones.
Pourquoi utiliser de l'eau stérile alors que tu autoclaves le milieu, perte de temps.

Citation :
j'ai aussi remarqué qu'un refroidissement rapide de la gélose après stérilisation la rendait plus ferme.
C'est la quantité qui rend la gélose +/- ferme et non un refroidissement rapide.

Citation :
Solution à 0.2% de HgCl2
Le chlorure de mercure est un produit toxique et dangereux,certainement pas en vente libre.Bref à bannir.
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitimeDim 6 Jan 2013 - 22:39

Citation :
je voulais savoir: les géloses sont incubées à quelle température?
existe-t-il une température optimale?
et pour la lumière, tu préconises quoi?

Une température entre 20-25 degré je pense et pour la lumière il ne faut pas quelle soit trop forte, j'ai placé bocaux a proximité d'un turbo néon 110w mais pas directement dessous Wink
Citation :

A quelle température est ton réfrigérateur et pourquoi mettre la gélose dans le frigo?

A la température normal d'un réfrigérateur je ne suis pas allez mesurer
Et pour la gélose au frigo pour ça:
Mp que j'ai envoyé: "Bon bah j'ai refondu mon milieu ( il y avait en fait une partie un peu gélifié et du surnageant ) et rajouté de l'agar (4 pointes de couteau donc à la louche) et après stérilisation c'était mieux ! (mais pas top encore)
Et en refondant mon milieu j'ai remué avec une fourchette et j'ai observé que sur les pointes des dents de celles ci se formaient des boules de géloses assez compact .... je me suis dit tiens avec un changement rapide de température ça à l'air de marcher !
J'ai donc mis mon dernier bocal dans le bas du frigo environ 15 min et en le sortant il était nickel ! je pouvais même renversé le pot "

Citation :
Pourquoi utiliser de l'eau stérile alors que tu autoclaves le milieu, perte de temps.

Oui là tu as raison ce n'est pas utile si c'est uniquement pour cette usage, mais on peut utiliser cette même eau pour préparer les solution de rinçage de l'étape 2 par exemple.

Citation :

C'est la quantité qui rend la gélose +/- ferme et non un refroidissement rapide.

Comment tu expliques alors que pour la même solution j'ai des texture différente dans ce cas ?

Citation :
Le chlorure de mercure est un produit toxique et dangereux,certainement pas en vente libre.Bref à bannir.

Cette méthode est donc peut être uniquement utiliser en labo alors ...
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MessageSujet: Re: (A Supprimer)   (A Supprimer) Icon_minitime

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